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王維洪 羅亞東 俞萬強
杭州和爲祥生物科技有限公司
豬人工(gōng)授精技術在國内始于上(shàng)世紀五十年代,盛于七十年代,但(dàn)由于精液儲存設備落後、精液保存技術匮乏和(hé)外(wài)三元母豬發情診斷難度較大(dà)等原因,人工(gōng)授精的技術優勢一直未能(néng)得到(dào)充分體現(xiàn),進而導緻養殖業者對(duì)該技術失去信心。直到(dào)本世紀初,在藍耳病等急性傳染病暴發的背景下(xià),随着17℃恒溫保存箱和(hé)商品化豬精液保存劑等新型人工(gōng)授精器材的面世,人工(gōng)授精的成功率逐漸得到(dào)提高(gāo),并在中等規模豬場開(kāi)始興起。報(bào)道(dào)測算(suàn),2001年,使用(yòng)人工(gōng)授精一頭母豬年可節約成本在200元以上(shàng)。鑒于人工(gōng)授精技術在降低(dī)防疫壓力和(hé)控制成本方面的明(míng)顯優勢,經過十餘年的日趨成熟和(hé)蓬勃發展,到(dào)2010年統計(jì),全國人工(gōng)授精的普及率已經超過70%,時(shí)至今日,普及率則已達到(dào)90%以上(shàng)。
而在人工(gōng)授精中,精液質量評定與體外(wài)保存是兩個關鍵因素,現(xiàn)就這(zhè)兩個方面作(zuò)一探讨。
1 精液質量的評定
1.1 精液質量評定的方法
精液質量評定包括體積、顔色、密度、活力和(hé)形态等方面。目前有人工(gōng)評定與CASA(Computer-aided sperm analysis)計(jì)算(suàn)機輔助精子分析評定兩種方法。
1.1.1 人工(gōng)評定
人工(gōng)評定:就是人工(gōng)在顯微鏡下(xià)用(yòng)血球細胞計(jì)數器計(jì)量精子的數量、活動精子數,以計(jì)算(suàn)精液的密度和(hé)活力。
精子密度:最初借肋光學顯微鏡,将其分爲密、中、稀三個級别進行分析,後來(lái)開(kāi)始用(yòng)計(jì)數闆或密度儀進行定量分析,當然這(zhè)就克服了(le)主觀性,提高(gāo)準确性。
活動精子百分率(TM%,The percentage of total motile spermatozoa)指活精子數占總精子數的百分比。目前常用(yòng)的是在顯微鏡視(shì)野下(xià)觀察到(dào)的運動精子作(zuò)爲活精子。
精子活力:這(zhè)是評價精子質量比較常用(yòng)的指标,目前主要以肉眼在顯微鏡視(shì)野下(xià)觀測做直線運動精子的百分率進行判斷,也(yě)具有很(hěn)強的主觀性。且各個國家制定的标準也(yě)不盡相同。
形态檢測:一般分爲畸形率與精子頂體異常率兩個部分。畸形率可在顯微鏡下(xià)肉眼根據精子的結構與形态進行判定,主觀性大(dà),正常精子中也(yě)會(huì)存在一定比例的畸形精子,但(dàn)一般不會(huì)超過20%,良好(hǎo)精液中精子畸形率不超過18%。精子頂體分析則通過姬姆薩染色法或熒光染色法進行,需要掌握一定的染色技術,目前在國内尚不普及。
1.1.2 計(jì)算(suàn)機輔助精子分析(CASA)
計(jì)算(suàn)機輔助精子分析(CASA):CASA系統快(kuài)速簡便,可以在很(hěn)大(dà)程度上(shàng)避免人工(gōng)評定的主觀性,更可以實現(xiàn)檢測的标準化,目前在國内大(dà)豬場和(hé)人工(gōng)授精站(zhàn)中逐漸被采用(yòng)。目前市場上(shàng)大(dà)多CASA系統,不但(dàn)可以實現(xiàn)常規檢測,還可以對(duì)精子運動方式、運動軌迹和(hé)運動速率進行檢測。但(dàn)我國目前還未出台CASA标準,所以對(duì)衆多CASA的優劣難于作(zuò)出一個肯定的判斷。
1.1.3 其他(tā)方法
近來(lái)随着技術的發展和(hé)低(dī)溫生物學的不斷深入,精子質量評價的新方法也(yě)開(kāi)始出現(xiàn),主要有精子質膜完整性、精子線粒體活性、精子頂體完整性、精子獲能(néng)檢測、精子DNA完整性的檢測以及受精能(néng)力檢測等方面,因目前還處于研究階段,在此不作(zuò)闡述。
1.2 精液質量的常規值
正常情況下(xià),公豬的射精量在150毫升~250毫升之間。個體差異和(hé)品種差異,個别公豬一次射精的精液總量也(yě)可能(néng)達到(dào)600毫升。如果一頭公豬平均射精量少于80毫升,就應認爲這(zhè)頭公豬的射精量不足。
正常的公豬精液從(cóng)淺灰白(bái)色到(dào)濃乳白(bái)色。但(dàn)不正常的精液色澤并不少見。一是精液透明(míng)度高(gāo),這(zhè)是精液精子密度低(dī)的一個明(míng)顯表現(xiàn)。透明(míng)度高(gāo)的精液,不必對(duì)精液做進一步的處理(lǐ),直接按不合格精液處理(lǐ)。二是鮮紅(hóng)色的精液,說明(míng)精液帶有較多的鮮血。三是綠色或黃色精液,是由于精液中有膿液造成的。這(zhè)種精液并不多見,在一些(xiē)老(lǎo)齡公豬偶有出現(xiàn)。主要原因是公豬的副性腺炎症造成。這(zhè)種公豬應盡快(kuài)淘汰,不必進行治療。
正常精液精子密度平均2.5億(1億~3億之間),從(cóng)鏡檢看(kàn)精子密度高(gāo)的精液往往呈雲霧狀。正常精液的pH值在7.2~7.8之間。
能(néng)夠前進運動的精子叫有效精子,唯有有效精子才有與卵子結合受精的可能(néng)性。精子的活力是指有效精子占總精子數的百分率,是鑒定精液品質比較主要的指标之一。一般用(yòng)目測視(shì)野中呈直線前進運動的精子數占觀察精子總數的百分比表示,采用(yòng)0~1.0十級評分,分爲10個等級。若視(shì)野中全部精子都作(zuò)直線前進運動,評爲1.0分;有90%的精子作(zuò)直線前進運動,評爲0.9分,其餘類推。不過也(yě)有采用(yòng)五級分制的評分方法。爲保證較高(gāo)的受精率,新鮮精液精子活力一般爲0.7~0.8,液态保存精液活力一般在0.6以上(shàng),冷凍保存精液活力在0.3以上(shàng),方可用(yòng)于輸精。
1.3 影響精液質量的因素
影響精液質量的因素有很(hěn)多,歸納起來(lái)有以下(xià)幾個:品種因素、年齡因素、營養因素、環境因素、疾病因素以及采精頻率等。
1.3.1 品種因素
正常而言采精量由多到(dào)少依次爲大(dà)約克、長白(bái)和(hé)杜洛克。如長白(bái)豬正常采精量在250ml,杜洛克的正常采精量則在200ml左右。
1.3.2 年齡因素
一般而言,從(cóng)性成熟到(dào)壯年,精液量和(hé)精子密度逐年增加,進入老(lǎo)年期就開(kāi)始下(xià)降。以大(dà)約克爲例,其在9月齡時(shí)采精量開(kāi)始增加,精子密度也(yě)達到(dào)了(le)1.75億/ml,到(dào)5歲後,其精子密度則下(xià)降到(dào)1.5億/ml以下(xià)。
1.3.3 營養因素
包括能(néng)量、蛋白(bái)、微量元素、維生素和(hé)激素水(shuǐ)平。其中體重指标是一個重要的參考因子,控制體重,防止過胖是日常飼養管理(lǐ)的一個要點,用(yòng)料量與體重的關系見下(xià)表。
表1 用(yòng)料量與體重的關系
體重(kg) | 總采食量(kg) | 維持需要用(yòng)料(kg) | 射精與生精用(yòng)料比(%) | 維持用(yòng)料比(%) |
60 | 1.75 | 0.7 | 3 | 40 |
90 | 2.5 | 1.1 | 3.2 | 44 |
120 | 2.9 | 1.35 | 3.4 | 47 |
200 | 3 | 3.8 | 75 | |
300 | 3.9 | 4.6 | 90 |
據研究,提高(gāo)日采食消化能(néng)到(dào)38.66MJ時(shí),雖提高(gāo)了(le)采精量和(hé)精子總數,但(dàn)降低(dī)了(le)精子密度,并增加了(le)精子畸形率,且這(zhè)一下(xià)降在統計(jì)學上(shàng)是顯著的。而當蛋白(bái)質提高(gāo)到(dào)19%時(shí),可提高(gāo)血液中激素水(shuǐ)平,從(cóng)而提高(gāo)公豬的性欲。在公豬日糧中添加一定量的維生素A和(hé)維生素E則可提高(gāo)精子數和(hé)活力。另外(wài),在公豬日糧中應防止微量元素鋅的缺乏,并可适當添加一定量的微量元素硒。
1.3.4 環境因素
主要考慮季節、溫度和(hé)環境衛生幾個方面。分季節而言,春季精液質量比較好(hǎo),夏季比較差。公豬比較适宜的環境溫度爲18℃~20℃。從(cóng)實踐中得出,在夏季肌注250mg睾酮可顯著減少高(gāo)溫對(duì)畸形率的影響。
1.3.5 疾病因素
一些(xiē)疾病(如藍耳病、僞狂犬等)會(huì)對(duì)精液質量産生嚴重的影響,因而需做好(hǎo)這(zhè)些(xiē)疾病的免疫工(gōng)作(zuò)。
1.3.6 采精頻率
采精頻率過高(gāo)不僅會(huì)造成采精量的減少,而且還會(huì)增加畸形精子的數量和(hé)比例。一般來(lái)說,對(duì)于年輕公豬和(hé)年老(lǎo)(5歲及以上(shàng))公豬,以一周一次爲宜;對(duì)2歲~4歲的公豬則以3~5天一次爲宜。
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